吖啶橙免疫荧光法

　　1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。

　　2、每次试验均需设置以下三种对照：

　　（1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物；

　　（2） 阴性对照：阴性血清+荧光标记物；

　　（3） 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

吖啶橙免疫荧光法对多种细菌感染如痢疾杆菌的诊断有重要意义。

　1用高倍稀释的吖啶橙溶液(1∶8万～1∶16万～1∶100万)与2～4单位的特异免疫血清等量混合后制成的诊断液，用其着染被检标本，2如其中含有相应细 菌，则与诊断液中的抗体结合，并产生特异的荧光，特别是细菌被抗体凝集成菌团后，用高稀释度的吖啶橙液仍可使细菌明显着色，3然后以1 000r/min离 心5～10分钟，取沉淀物倒于玻片上，用低倍荧光显微镜观察荧光菌团现象，当看到疏松，边缘不整齐，呈淡绿色的荧光菌团，大小在1mm以上者为阳性，4然后 用白金耳挑取荧光菌团作进一步的培养鉴定。