α-茶酚醋酸酯酶染色

　　必要时，对α醋酸萘酚酯酶染色阳性反应的标本，加做氯化钠抑制试验。红血病、红白血病、早幼粒细胞性白血病不被氟化钠试验抑制，仍为阳性。

α醋酸萘酚酯酶为白细胞中的非特异性酯酶，能将基质液中的α醋酸萘酚水解，产生α萘酚，再与重氮盐偶联，生成灰黑色不溶性沉淀，定位于酶活性所在的胞质内。阳性可见于单核细胞白血病、组织细胞白血病、网状细胞肉瘤、粒细胞-单核细胞性白血病、红血病、红白血病、早幼粒细胞性白血病等的细胞。　阴性见于多发性骨髓瘤的细胞。

（1）骨髓取材：取材部位有胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等。两岁以内小孩最好用胫骨，成人常取髂后上棘，此部位穿刺方便，病人也易接受。穿刺前要求严格消毒，杜绝细菌感染，除穿刺室紫外线消毒和皮肤消毒外，还应注意穿刺包和手套消毒时间有否过期。戴手套要熟练，避免手套接触未消毒物品。穿刺针进入髓腔时常有脱空感，吸取前针筒内应留有1ml左右的空隙，否则髓液很快进入针筒空隙而无法取出。针筒内若有水份也要用消毒纱布擦干，以免溶解细胞。吸液量一般控制在0.2ml左右，因吸量过多，易被外周血稀释。部分病人干抽或吸出量太少时，不要将针头立即拔出，可边抽边调节针头深浅，或边抽边缓慢外移针头，最后将针头内可能残留的髓液尽量推出、制片，以减少病人痛苦。

（2）涂片：骨髓取出后应立即注在一块斜放的玻片上，使多余的外周血自然下流，用推片刮取上部较多小粒的髓液在另一干净玻片上推片。玻片最好事先经稀硝酸液浸泡后用水冲洗，然后用蒸馏水浸泡，应避免用铁锈的烤箱烘烤或用铁丝筐盛放，以减少由铁剂污染而造成的铁染色假阳性。同时，做过细菌检查的玻片，最好不要再用于骨髓片检查。

（3）染色：选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上写上病人姓名、日期及“BM”标记。加瑞氏染色液8～12滴，用吸球吹吸并使其布满整张涂片，约半分钟后加姬姆萨稀释液5～10滴，再用吸球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染色时间一般为10～20min，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时应平放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3min；着色太深时，可用瑞氏染液滴加于涂片上，立即冲洗即可。各实验室最好能摸索出自己的染色经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆萨染液的单位，可用蒸馏水加少量天青（或美蓝）代替，但染色效果没有前者好。染好的涂片要自然干燥，切忌加热烘干，否则细胞退色而影响观察。

（4）求出粒、红细胞的总和之比。