羊水细胞性染色质

　　(1)染色体检查须于妊娠16～20周时取羊水标本。穿刺术前要排空尿液，两手叉腰，轻轻转动腰腹部。然后仰卧，用B超探测定位，选择好穿刺点，在严格的无菌操作条件下进行穿刺。一般抽取羊水20ml左右，放入洁净灭菌的离心管内，立即送检。

　　(2)这些先天性遗传病的染色体有增多、缺乏、易位、倒置等数量和结构的异常，常表现为一种综合征，如多发性畸形、生长迟缓和智力缺陷等，多数导致胎儿流产、早产或死产。

羊水细胞性染色质检查可以用于预测胎儿性别，以及估计某些遗传性疾病的可能发生概率。

取羊水过程：排空膀胱后取仰卧位。腹部消毒应以穿刺点为中心向外围扩大，半径不小于10㎝。铺无菌孔巾。穿刺点局部以0.5%利多卡因浸润麻醉。持7号无菌腰穿针垂直刺入。经腹壁及子宫壁两次阻力，进入羊膜腔时有组织抵抗突然消失的落空感。拔出针芯即有羊水流出，用注射器抽取羊水约20ml，按需要立即送检。随后拔除穿刺针，用棉球和纱布盖住针孔，加压5分钟后胶布固定。羊水细胞培养染色体检查过程：

(1)取孕期16～20周羊水15～30ml，1000r/ml离心10min。

(2)弃去多余上清液，留1ml羊水和沉淀细胞，轻轻打散成细胞悬液。

(3)移入25ml方形培养瓶中，加pH6.5～6.8(含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml)的培养基3ml及小牛血清1ml，置37℃温箱中培养。

(4)培养7～10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。

(5)待细胞集落扩大成片，并有许多透亮的圆形分裂细胞时，即可加入秋水仙素，使最终浓度为0.1～0.3μg/ml，置37℃温箱中再培养5～6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准：①以成纤维细胞为主要类型，成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察，生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。

(6)如果细胞生长不旺盛，生长周期不齐或细胞老化，未达收获标准，可在原瓶继续传代培养。方法：在无菌条件下先倒去培养液，加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴，摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5～10滴，在37℃下轻轻摇动约5min，使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml，在37℃静置培养4～5h。再小心更换培养液，继续培养，一般传代后3～5天即可收获。

(7)将培养液移至刻度离心管中，加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内，置37℃温箱中5min，然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中，与原培养液相混合，并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶，洗下的细胞也一并倒入该离心管，以1000r/min离心10min。

(8)吸弃上清液，加入预温37℃的0.075mol/LKCl低渗液3～5ml，置37℃10～15min。

(9)预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。