热盐水试验

　　不合宜人群：无。

　　检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天的晚八时以后，应禁食。

　　检查时要求：

　　1. 为保证获得完整的细胞核，第一是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。

　　2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

　　3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

热盐水试验是利用热盐水对血细胞进行检查，用于检查细胞核溶解情况。有助于急性白血病细胞类型的鉴别

1. 样本处理：　　

a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。　　

b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800*g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5*107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50ul Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。　　

2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700*g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;　

3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于Medium Buffer之上，4℃， 700*g 离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底;　　

5. 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉，1000*g 离心10min ，弃上清，得较纯的细胞核沉淀;　　

6. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。