血清胰岛细胞膜抗体

　　从胰岛β细胞分泌的胰岛素大部分在肝肾灭活，其中约40%～50%经门静脉入肝灭活，因此肝肾功能状态，尤其是肝功能情况是影响循环血中胰岛素含量的重要因素;糖尿病患者在使用胰岛素，尤其是动物胰岛素后，体内常产生胰岛素抗体，由于胰岛素与胰岛素抗体可产生高度免疫反应，故可影响血浆胰岛素的测定。另外，血液中胰岛素原、前胰岛素原含量以及垂体前叶、肾上腺皮质、甲状腺亢进等内分泌系统疾病，噻嗪类利尿剂、糖皮质激素等多种药物以及感染、发热、手术等应激状态都是影响胰岛素测定的常见因素。

胰岛细胞膜抗体(islet cell surface antibody，ICAS)是胰岛细胞膜表面抗原的自身抗体，属IgG抗体，具有脏器特异性，而非种属特异性。ICAS可作用于胰岛细胞表面抗原，形成抗原抗体复合物，从而影响细胞的正常功能。

(1)酶联免疫吸附法

将胰岛素-卵清蛋白用包被液稀释至20μg/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔100μl，4℃过夜。洗涤液洗3次，每次3min，用pH7.4，0.01mol/LPBS(内含15%小牛血清)封闭，43℃1h。同上法洗后加待测血清(1∶100)或阴性、阳性对照，每孔100μl，43℃1h(37℃2h)。同上法洗后加最适稀释度的HRP-SPA，每孔100μl，45℃1h(37℃2h)。同上法洗后加底物(OPD-H2O2)溶液，每孔100μl，37℃10min显色。用2mol/LH4SO4终止反应。酶联免疫检测仪检测492nm波长吸光度值。

(2)免疫酶斑点法将NC膜划成5mm×5mm的小方格，浸于pH7.4，0.01mol/LPBS中30min，滤纸吸干。取2μl胰岛素-卵清蛋白交联物点样于小方格中央，室温自然干燥。用pH7.4，0.01mol/LPBS(内含卵清蛋白10.0g/L)封闭，45℃1h，滤纸吸干。加待测血清2μl于抗原包被处，45℃30min后，用pH7.4，0.01mol/LPBS洗3次，每次3min，滤纸吸干。将膜置于最适浓度HRP-SPA中，45℃30min，同上法洗后滤纸吸干。浸于新配底物中5～10min，显色后流水冲洗，终止反应。