麝香草酸浊度试验

　　TTT是一个很简单的试验，但各试验室间出入往往不小。造成此差异因素很多;首先是虽然同称为TTT试验，但各个实验室在试剂配制，标准曲线绘制或标准管配制方法上并不相同。

　　(1)国内所报告的TTT单位为Shank(襄克)单位。1944年Maclagen(麦克莱根)首先建立TTT试验，当时以Kingsley(金斯莱)尿蛋白比浊管表示TTT浊度单位(相当于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所显示的浊度为一个Maclagan单位)。后来，Shank和Hoagland改用BaSO4悬液作为浊度标准，由0.0962mol/L BaCl2加H2SO4所产生的浊度相当于Maclagan所应用的Kingsley标准。但在发表文章

　　时，误印为0.0962N BaCl2，因此测定结果为麦氏单位的二倍(1个麦氏单位=2个Shank单位)。

　　(2)血清要新鲜，应早晨空腹抽血。用分光光度计比浊法测定麝浊时，如血内脂质较多，可用生理盐水6ml代替缓冲液稀释血清，作空白管。

　　(3)麝香草酚-巴比妥缓冲液的pH应在7.50～7.60。pH增高，敏感度降低，可出现假阴性;pH降低，敏感度升高，可出现假阳性。

　　(4)为了简化手续，不少实验室用100g/L麝香草酚乙醇溶液，直接加入巴比妥缓冲液中，省去结晶和过滤步骤，但此配方较原法多含1%乙醇，试验结果表明比原配方的浊度偏离约20%，絮状试验阳性率反而降低。

　　(5)麝香草酚浊度试验结果随温度的改变而有所变化。一般是温度高，浊度低;温度低，浊度高。为了克服这一误差，可以从表1上将不同温度下的浊度结果换算成25℃的结果以便于比较。

　　使用说明：以6u一行为例，在10℃时测定的6u，实际上在25℃时为4.7u。在30℃时测定的6u，在25℃时为7.2u。余类推。

　　(6)配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点：①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的，但当浓度小于0.1mol/L，形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此，硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度：10℃时形成的硫酸钡颗粒细，浊度较高，结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗，浊度较低，重复性不易控制。③操作手法：混和方法不同，形成的硫酸钡颗粒大小不同，结果相差很大。所以，每次按规定操作可提高精密度。

　　(7)麝香草酚缓冲液易变质，但如保存于冰箱中，可因结晶逐渐析出而降低敏感度，故平时使用时，仍应置室温中，如显混浊，即不能用。

　　(8)麝香草酚应为洁白晶体，如带黄色，须重结晶处理。可按下法重结晶精制：取麝香草酚100g，溶于100ml 95%乙醇中，以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水，混匀。静置20min后吸滤，用冷蒸馏水洗结晶两次，可得到洁白的结晶，置干燥器内待完全干燥后使用。

　　(9)用巴比妥配制的试剂不能久置，超过2周后，TTT结果有增高趋势，一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关，因为久置后，巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液，具有稳定性高，所配TTT试剂放室温至少可保存3个月，且浊度结果受室温变化的影响小。

　　(10)光电比浊法与光电比色法有所不同，比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外，悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射，因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外，还有折射的光，后者不是平行光束，混和液和光电池之间距离越大，则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时，比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边，可以提高准确度。

　　(11)麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比，要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。

　　缓冲液中麝香草酚含量测定法：麝香草酚标准液(1ml含0.1mg)：准确称取试剂规格麝香草酚100mg，加水溶解后加水至1L。

　　取待测麝香草酚缓冲液1ml，用水稀释至10ml，以后按表2进行测定。

　　混匀37℃水浴放置15min，750nm比色，以空白管校正吸光度至零，读取各管吸光度，按下式计算：

测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。有关这方面的测定在别外章节中已有详尽讨论，本节中主要叙述一些和蛋白质代谢有关的简单血清胶体稳定试验。各种血清胶体稳定性试验的原理基本相同，但所用的试剂不同，促进和抑制絮浊的作用有差异，目前临床常用的有TTT试验。

1.取与标准比浊管口径相同的试管，加入新鲜血清0.05ml，再加入麝香草酚巴比巴比妥缓冲液3ml，混合，室温静置30min，再颠倒混合数次。

2.目视比浊时，可背朝光，比浊管下衬有字白纸，辨认字迹清晰程度来判定浊度单位。与测定管浊度相同的标准比浊管的单位数，即为测定血清的单位数。如用分光光度计比浊时，以麝香草酚巴比巴比妥缓冲液校正“0”点，波长650nm，读取测定管的吸光度，查标准曲线求出浊度单位。