血清载脂蛋白AⅡ

　　(1)免疫透射比浊法：

　　①关于抗血清：比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅱ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯，这不是一般实验室都能做到的。抗血清效价(滴度)不可低于16。目前国内某些商品试剂中，apoA-Ⅱ抗血清效价极低，选购试剂盒时必须注意。如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验，应请有条件的单位鉴定之。

　　②上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl)，如有精密加样器，可作20倍稀释(用10μl)。为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器)，作适当修改时应注意抗原抗体的比例，必须十分注意反应体系中不可有抗原过量，线性上限不可低于2.5g/L。换言之，抗血清用量必须充裕，否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低。目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低，操作中所定标本用量又过大(如3～5μl)，抗体明显不足，测出结果必然不准确。

　　③为了达到准确测定的目的，apoA-Ⅱ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果。一定范围(低标本用量)浓度(X)与浊度(Y)基本上成直线关系，直线回归计算出在Y轴上有一定截距(A值<0.1)，所以用单点校准计算结果偏差较大，使测出结果不能准确反映浓度的高低(高的偏低，低的偏高)。千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性。无论用何种自动化仪器，必须先试作校准曲线。如果在所用仪器及特定条件下反复测试，回归线的截距不明显时，才能采用单点校准法。标本用量在3～5&mu;l时，即使加大抗血清用量，浓度与浊度也不成直线关系，只能用曲线直线化转换后计算。

　　④主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清)，用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。用表面活性剂消浊的作用也有限，所以在测定中必须作标本空白管。除了自动分析中可采用两点法外，手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的。为了减少基质效应对浊度反应的影响，必须用定值血清作校准物。此外，尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除。

　　⑤有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确，是误差的重要来源。

　　(2)火箭电泳法：

　　①抗原稀释倍数与抗血清用量的选择，应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。本法同时测定apoA-Ⅱ与apoB，应调整两种抗血清用量，使二者峰高有区别，apoB峰高不小于1cm。

　　②不同种类来源的抗血清(如兔与羊)，在等效价的情况下进行试验，结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好。用兔血清时峰形尖细，而羊血清所产生的峰粗，峰尖圆钝，有时在峰顶前出现虚影。校准血清所作校准曲线斜率也不同。但不论用何种抗血清，定量结果差别不大。

　　③在一定条件下电泳，不同稀释度校准血清的峰高不会有明显变动，校准曲线斜率基本一致。如标本峰高超出校准曲线范围时，应调整标本稀释倍数后重测。板间CV通常小于5%。

　　④火箭电泳结果可以用染色法或直接肉眼观察可见的火箭峰。前者用标本少，节省抗血清，但如适当增加标本及抗血清用量，不染色更为方便。所用琼脂糖应为标准电渗或低电渗的，凝胶中加入适量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。

　　⑤火箭峰的测量可以计算面积或峰高，面积是峰高乘以峰宽(峰半高处的宽度)。测量精度最好能达0.1mm。须用机械或电子放大设备。标准曲线范围内峰高以1～4cm为宜。

　　⑥本法适用于少量标本分析。也适用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)测定。

测量载脂蛋白AⅡ的含量，降低可见于冠心病、糖尿病、肾病综合征、遗传性ApoA-Ⅰ缺乏症(Tangier病)、家族性低α-脂蛋白血症、鱼眼病、重度营养不良、肝炎活动期、肝功能低下。

1.备齐用物，标本容器上贴好标签，核对无误后向患者解释以取得合作。露出患者手臂，选择静脉，于静脉穿刺部位上方约4～6cm处扎紧止血带，并嘱患者握紧拳头，使静脉充盈显露。　　

2.常规消毒皮肤，待干。　　

3.在穿刺部位下方，以左手拇指拉紧皮肤并固定静脉，右手持注射器，针头斜面向上与皮肤成15度～30度，在静脉上或旁侧刺入皮下，再沿静脉走向潜行刺入静脉，见回血后将针头略放平，稍前行固定不动，抽血至需要量时，放松止血带，嘱患者松拳，干棉签按压穿刺点，迅速拔出针头，并将患者前臂屈曲压迫片刻。　　

4.卸下针头，将血液沿管壁缓缓注入容器内，切勿将泡沫注入，以免溶血。容器内放有玻璃珠时应迅速摇动，以除去纤维蛋白原;如系抗凝试管，应在双手内旋转搓动，以防凝固;如系干燥试管，不应摇动;如系液体培养基，应使血液与培养液混匀，并在血液注入培养瓶前后，用火焰消毒瓶口，注意勿使瓶塞接触血液。　　

5.送实验室检查。