流式细胞DNA分析

  流式细胞DNA分析是可以研究间期细胞,并不受细胞增殖状态的影响,对检测胸腔积液中的恶性细胞的有重要意义的一种检查方法。

  流式细胞仪的检测范围:

  1.流式细胞仪可以检测细胞结构,包括:细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、RNA 含量、蛋白质含量。

  2.流式细胞仪可以检测细胞功能,包括:细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。

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目录:
基本信息 注意事项 指标结果解读 相关疾病 相关症状 检查作用 检查过程
  • 检查部位: 血液血管
  • 科室: 内科  体检保健科 
  • 空腹检查:
  • 指标解读:
    正 常
    异 常
  • 相关疾病: 反应性浆细胞增多症 小儿苯丙酮尿症 结核性胸膜炎 [更多]
  • 相关症状: 渗出性胸水 血性胸水 恶性胸水 肺癌胸水 胸水 [更多]

流式细胞DNA分析注意事项

  流式细胞仪并非是完全自动化的仪器,准确的实验结果还需要准确的人工技术配合,所以标本制备需要规范,仪器本身亦需要质量控制。

  (一) 流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制

  流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用,其免疫荧光染色的标本制备非常重要,常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法如下:

  (1) 确保标本上机检测前的浓度为1X106细胞/ml,细胞浓度过低直接影响检测结果。

  (2) 使用蛋白封闭剂,封闭非特异结合位点,尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

  (3) 荧光抗体染色后充分洗涤,注意混匀和离心速度,减少重叠细胞和细胞碎片。

  (4) 设置对照样品,采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。

  (5) 判定结果时,应注意减去本底荧光,为使免疫荧光的定量分析更精确,应用计算机程序软件,用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值,可以得到更准确的免疫荧光定量结果。

  (6) 注意染色后避光,保证细胞免疫荧光的稳定。

  (二) DNA 倍体分析的质量控制仍没有统一的标准,各文献报道的实验结果差异较大,1993年10月美国癌症研究组织制定了FCMDNA 测定的统一标准,我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践,对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。

  (1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时,要避免出血坏死组织。

  (2) 标本采集后要及时固定或深低温保存,以免组织发生自溶,DNA 降解,而造成测试结果的误差。

  (3) 固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度,70%的乙醇固定效果较好。

  (4) 单细胞悬液制备过程中,注意将待测细胞成分分离出来,减少其他成分的干扰,并注意不要损伤该群细胞。

  (5) 细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度,即1X106细胞/ml,杂质、碎片、团块和重叠细胞应<2%,对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品,至少有20%的肿瘤细胞存在。

  (6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意:取材时应选取无自溶、坏死的组织,对肿瘤组织标本,选取含肿瘤细胞丰富的区域;石蜡组织片的厚度要适宜,最好为40~50μm 。过薄或过厚的切片均会影响检测结果;彻底脱蜡,以免残留的石蜡影响酶的消化活性,验证脱蜡是否完全的方法是弃去二甲苯,加入100%乙醇,如果无絮状物浮起,说明蜡已脱净;水化要充分,使组织还原到与新鲜组织相似的状态;注意消化的时间和消化酶的活性。常规使用0.5%胃蛋白酶,pH 1.5。

  (三) 操作方面

  (1) 流式细胞仪在整个工作过程中处于最佳状态,能保证定量检测的准确性和检测精度。使用标准样品调整仪器的变异系数在最小范围,分辨率在最好状态,能避免在测量过程中仪器条件的变化引起的检测误差。

  (2) 评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数(CV),对于校准样品,其CV值越小越好,CV值越小,说明仪器校正的精度越高。校准样品包括非生物样品(荧光微球)和生物细胞样品(人淋巴细胞、鸡红细胞等) 。目前,非生物荧光微球已有商品试剂,CV一般<2%~3%。

  (四) 资料分析方面

  (1) 当样品中碎片杂质或团块过多,所测细胞数在20%以下,组方图的基线抬高时,应放弃分析处理。

  (2) 做细胞周期分析时,样品细胞数应在1万个,排除碎片、杂质和团块,当异倍体细胞数占总细胞数10%以下时,需要结合其他诊断指标,不可盲目下结论,至少异倍体细胞占总细胞数的20%以上,可以确定异倍体的存在。

  (3) DNA分析时,正常二倍体细胞组方图CV值>8%时放弃分析,但肿瘤细胞的CV值>8%,与肿瘤细胞的异质性有关。另外,DNA倍体分析时,同源组织的不同个体会出现10 %的漂移。

  (4 )DNA倍体标准的质量控制,采用相同个体同源正常组织、同样固定方法、相同的样品处理方法、相同的染色方法、同步染色、同样的仪器检测条件、正常的二倍体组织作为内标准。

流式细胞DNA分析指标解读结果

正常:

  身体处于动态平衡中,没有疾病。

异常:

有资料表示对71例胸腔积液做流式细胞DNA分析,结果显示,对恶性胸腔积液诊断的敏感性为52%,特异性达100%。若与常规检查联合应用,则可使诊断的敏感性达到94%。癌性胸水细胞的DNA分析可见异倍体和S期、G2/M期细胞比例增高。  需要检查的人群:疑似有癌性胸水等相关疾病者

流式细胞DNA分析相关症状

流式细胞DNA分析检查作用

流式细胞DNA分析是可以研究间期细胞,并不受细胞增殖状态的影响,对检测胸腔积液中的恶性细胞的有重要意义的一种检查方法。

流式细胞DNA分析检查过程

1.备齐用物,标本容器上贴好标签,核对无误后向患者解释以取得合作。露出患者手臂,选择静脉,于静脉穿刺部位上方约4~6cm处扎紧止血带,并嘱患者握紧拳头,使静脉充盈显露。 

2.常规消毒皮肤,待干。  

3.在穿刺部位下方,以左手拇指拉紧皮肤并固定静脉,右手持注射器,针头斜面向上与皮肤成15度~30度,在静脉上或旁侧刺入皮下,再沿静脉走向潜行刺入静脉,见回血后将针头略放平,稍前行固定不动,抽血至需要量时,放松止血带,嘱患者松拳,干棉签按压穿刺点,迅速拔出针头,并将患者前臂屈曲压迫片刻。  

4.卸下针头,将血液沿管壁缓缓注入容器内,切勿将泡沫注入,以免溶血。容器内放有玻璃珠时应迅速摇动,以除去纤维蛋白原;如系抗凝试管,应在双手内旋转搓动,以防凝固;如系干燥试管,不应摇动;如系液体培养基,应使血液与培养液混匀,并在血液注入培养瓶前后,用火焰消毒瓶口,注意勿使瓶塞接触血液。  

5.送实验室检查